植物全磷的测定(二) 直接用标准酸溶液滴定

四、植物钼锑抗比色法

1、全磷方法原理

植物中的测定氮、磷是植物以有机态为主，钾则以离子态存在。全磷用浓H₂SO₄-H₂O₂氧化剂消煮植物样品时，测定其中的植物有机物经脱水碳化、氧化分解，全磷变成CO₂和H₂0,测定使有机氮和磷转化为铵盐和磷酸盐，可在同一份消煮液中分别测定全氮、植物磷、全磷钾(见磷、测定钾测定)。植物而且该消煮液对于热馏、全磷扩散和比色等定氮方法均适用。测定

消煮液中的铵盐在碱化后成为NH₃，经扩散(或蒸馏)，用H₃BO₃溶液吸收，直接用标准酸溶液滴定，以甲基红一浪甲酚绿混合指示剂指示滴定终点，即由蓝变萦红色。由此计算含氮量。

2、仪器及设备

分光光度计。

3、试剂

过氧化氢〔ω(H₂O₂) ≈30%，分析纯]。

4、操作步骤

（1）H₂SO₄-H₂0₂消煮：称取烘干、磨碎(0.25mm)植物样品0.3000g～0.5000g,置于50mL开氏瓶(或消煮管)中(勿将样品粘附在瓶颈上)。先滴入少些水湿润样品，然后加8mL浓H₂SO⁴，轻轻摇匀(最好放置过夜)，瓶口放一弯颈小漏斗，在电炉(或消煮炉)上先文火消煮，待H₂SO₄分解冒大量白烟后再升高温度，当溶液呈均匀的棕黑色时取下。稍冷后加10滴H₂O₂，摇匀，再加热至微沸，消煮约5min，取下，稍冷后，重复加H₂0₂5滴～10滴，再消煮。如此重复共3次～5次，每次添加的H₂0₂量应逐次减少，消煮到溶液呈无色或清亮后，再加热约5 min～10min，以除尽剩余的H₂O₂(否则会影响N,P比色测定)。取下，冷却。用少量水冲洗弯颈漏斗，洗液流入开氏瓶。将消煮液无损地洗入100 mL容量瓶中，用水定容，摇匀。过滤或放置澄清后供氮、磷、钾的测定。

（2）钼锑坑比色吸取待测液2.00mL～5.00mL(含P5μg～25μg)于50mL容量瓶中。称取通过100目((0.149mm)的烘干土壤样品0.2500g 置于铂坩埚中，另外称取研细的无水碳酸钠(试剂1) 2g，将其中的1.8g小心地用玻璃棒与样品充分搅拌混匀，其余的碳酸钠铺盖于混合物表面，并轻轻敲动坩埚，使表面铺平。将坩埚放入温电炉中，升温至900℃～920℃熔融，20min后取出，趁热时揭盖观察熔块状态，若表面成凹形，颇色匀一，无气泡时则熔融已完全(若有白色原状碳酸钠或表面高低不平者，则表示熔触尚不完全，应继续熔5min～10 min)。待坩埚冷却至不太烫手时，益好坩埚盖，戴上手套，将坩埚轻轻振拍，使熔块脱出(如熔块尚不能脱出，可用手轻轻捏动坩埚四周，使熔块与坩埚脱离)。然后将熔块移入100mL高型烧杯中，盖上表面皿，小心地加入约10mL硫酸溶液(试剂2)溶解熔块，并用热水洗净坩埚。将烧杯中的内容物洗入100 mL容量瓶中，用热水及橡皮头玻瑞棒洗净烧杯，洗涤液均倒入上述容量瓶中，冷却后定容，用干燥泥斗和无磷滤纸过撼于三角瓶中。

吸取溶液5mL～10mL(含5μgP～25μgP)于50mL容量瓶中，加水稀释至约30 mL,加二硝基酚指示剂2滴，用碳酸钠溶液[c(二分之一Na₂CO₃)=4mol·L^-1〕或氢氧化钠溶液[c (NaOH )=2mol·L^-1〕及稀硫酸溶液[c(二分之一H₂SO₄)=0.5 mol·L^-1)〕调节pH至溶液刚呈微黄色。然后加入钼锑抗显色剂(试剂4)5mL,摇匀，用水定容。在室温高于15℃的条件下放置30min后，在分光光度计上用波长700nm(光电比色计用红色滤光片)比色，以空白试验溶液为参比液调零点，读取吸收值，在工作曲线上查出显色液的Pmg·L^-1数。颜色在8h内可保持稳定。

（3）工作曲线的绘制

分别吸取磷标准溶液(试剂7)0mL、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、于50mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至约30mL，加入钼锑抗显色剂5mL，摇匀，定容。即得0、0.1mg·L^-1、0.2 mg·L^-1、0.3 mg·L^-1、0.4 mg·L^-1、0.5 mg·L^-1、0.6 mg·L^-1标准系列溶液，与待测溶液同时比色，读取吸收值。在方格坐标纸上以吸收值为纵坐标，P mg·L^-1数为横坐标，绘制成工作曲线。

5、结果计算

稀释倍数为:

参考资料：土壤农业化学分析方法

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